免疫胶体金检测技术主要包括斑点免疫金渗滤法(DIGFA)和胶体金免疫层析法(CGEIA),其基本原理均是以微孔膜为固相载体,包被已知抗原或抗体,加入待测样本后,经微孔膜的渗滤作用或毛细管虹吸作用使标本中的抗体或抗原与膜上包被的抗原或抗体结合,再通过胶体金标记物与之反应形成红色的可见结果而达到检测目的。
1、斑点免疫金渗滤法(DIGFA)
又叫滴金免疫渗滤试验(DIFA),由SpielbergF等于1989年建立,为穿流形式(FlowThrough)。该实验以微孔膜为固相载体,其上固定有已知特异性抗原或抗体,将其装入充满吸水材料的渗滤装置中,加入待检标本后,经滤膜的毛细管作用或渗滤作用使标本中的抗原或抗体与膜上包被的抗体或抗原结合,再用胶体金结合物标记而达到检测目的。反应可根据待测物的不同,选择不同试验方法,特别适合于间接法检测抗体或捕获法检测IgM。一般需要3~5步,但所需时间很短,只需3~6min。
2、胶体金免疫层析法(CGEIA)
该试验是在免疫渗滤试验的基础上建立的一种简易的检测技术,由BeggsM等 先用于人绒毛膜促性腺(HCG)的测定,为侧向横流形式((LateralFlow)。该技术也是以微孔膜为固相载体,其原理是将已知的特异性抗原(或抗体)固定于膜上作为检测带,胶体金标记物干燥在玻璃纤维的结合释放垫上,其一端与膜相连,另一端与样品垫相连膜的另一端连有吸水垫。当加人待测样品(全血、血清、尿或其他体液)后,样品通过毛细管的扩散作用向前移动,并通过含标记物的玻璃纤维,使标记物重新水化,并与胶体金标记物相互反应,然后一起向前泳动,至检测线(固定有特异性抗原或抗体)时标记物与待测物的复合物会被检测线截获,而出现明显而直观的红色结果。如果样品中不含待测物,则会和游离标记物一起越过检测线,到达质控线或试验终止线,被截获而出现红色的对照结果。多采用夹心法检测抗原或间接法检测抗体,也有采用双孔间接法或反流免疫层析法检测IgG和IgM对于小分子抗原(如残留、类固醇的测定等)来说则宜采用竞争法。