胶体金的制备

　　1、胶体金的制备方法
　　制备胶体金溶液   常用的方法是化学还原法，基本原理是向浓度的金溶液内加入量的还原剂使金离子变成金原子。使用不同种类、不同剂量的还原剂，可制备出不同大小的胶体金颗粒。常用的制备方法有自磷还原法、抗坏血酸还原法、柠檬酸三钠还原法、靴酸~柠檬酸三钠还原法、乙醇超声波还原法和硼氢化钠还原法等。其中   常用的制备方法为柠檬酸三钠还原法：将0.01的氯金酸溶液加热至沸腾厂，搅拌的同时加入1%的柠檬酸三钠水溶液，继续加热，直到溶液颜色逐渐由浅黄色变为澄清透明的红色。此法制备程序简单，胶体金的颗粒形状、大小较均一。
　　2、胶体金标记
　　胶体金-蛋白复合物又称胶体金探针，用于免疫测定时多简称为免疫胶体金(immunogold)。胶体金标记蛋白的制备，实质上是蛋白质等生物大分子物质被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。标记前需将蛋白质用双蒸水透析以除去影响标记的电解质，然后通过系列稀释法找出能使胶体金稳定的蛋白质溶液的   低浓度，在此基础上再加1%~20%，即为   佳标记量。将待标记蛋白以   佳标记量适当稀释后，缓慢滴加到胶体金中，继续搅拌20min，然后缓慢滴加10%的BSA至终浓度为0.5%或1%(或加入10%PEG20000至终浓度为1%)，继续搅拌1h。4℃静置2~3h或(过夜)，终止反应。反应结束后，4℃10000r/min离心1h，弃上清液。将沉淀悬浮于1/10原体积的1%BSA中，离心洗涤，加入等体积的1%BSA溶液，   后加入含0.02%叠氮钠剂的下BS缓冲液悬浮，即可获得胶体金探针，也可加甘油混匀，4℃保存备用。标记好的免疫胶体金溶液可4℃保存数月。