金标卡板GICA技术检测动物疾病病原体细菌

　　猪链球菌有较强的致病性，可以引起猪脑膜炎、心内膜炎、败血症、肺炎甚至突然死亡。同时也可感染人，引起败血症、中毒性休克综合征和脑膜炎。因为此病流行广，发病人、猪的数量多，对公共卫生和养殖业有的威胁。鞠莹等建立了胶体金免疫层析法用于检测猪链球菌2型的方法：用胶体金标记猪链球菌2型多克隆抗体，制得胶体金免疫层析金标卡板试纸条。结果表明，所研制的胶体金免疫层析金标卡板试纸条的   低检测限为100万CFU/mL，标本处理简单，10min即可出结果。特异性方面仅与SS1/2有交叉反应，与其它常见致病菌及链球菌属中的15个群均无交叉反应。而且通过对模拟样品的检测，其特异性和敏感性未受到改变。
　　刘洪贵等建立了一种检测金黄色葡萄球菌的新方法：双抗夹心法。该方法用胶体金标记抗金黄色葡萄球菌凝集因子A重组蛋白特异性抗体，再用抗金黄色葡萄球菌IgG包被硝酸纤维素膜，制成免疫层析检测试纸条。结果表明，敏感性为1万CFU/mL，但与PCR方法相比低一个数量级。与大肠杆菌、链球菌、李氏杆菌、巴氏杆菌及芽抱杆菌均无交叉，具有较好的特异性。
　　大肠杆菌O157是产志贺毒素大肠杆菌的主要血清型。志贺毒素是大肠杆菌O157的主要毒力因子之一，有Stx1和Stx2两种生物型，分泌Stx2的毒力较强。高成秀利用大肠杆菌BL21获得纯化的融合蛋白，并多次免疫新西兰大白兔，获得重组Stx2B的多克隆抗体；同时制备了大肠杆菌O157单克隆抗体。采用双抗夹心法分别制备了Stx2试纸条和大肠杆菌试纸条。用Stx2试纸条对58株已鉴定的大肠杆菌进行检测，与Vero细胞毒性试验相比较，其阳性检出符合率为50%，显色时间为5~10min；而大肠杆菌O157试纸条的检测结果与凝集试验相比较，其阳性检测符合率为87.5%，检测灵敏度为10万CFU/mL，显色时间为3~5min。阳性率的批内变异系数为2.1%、批间变异系数为6.9%，这说明大肠杆菌O157金标卡板试纸条的特异性、重复性和敏感性较好。但Stx2试纸条的阳性检测率和重复性还有待进一步提高。
　　牛结核病是由分枝杆菌引起的人兽共患的慢性消耗性传染病，世界卫生组织推荐的检测方法为结核菌素皮内变态反应，该检测方法易出现假阳性，即易受到非致病性分枝杆菌的干扰。玛向辉等建立了牛结核胶体金免疫层析诊断方法，用兔抗牛血清蛋白和大肠埃希菌表达的牛分枝杆菌MPB70-83-ESAT-6蛋白分别作为胶体金标记抗原和检测线上的捕获抗原，制备了牛结核抗体检测试纸条。结果显示，所研制的试纸条不与牛副结核、牛巴贝斯病、口蹄疫和牛传染性鼻气管炎病阳性血清作用，因此具有很好的特异性。另外，金标卡板试纸条与TST的符合率为80%。