金标卡板GICA技术既可以检测抗原又可以检测抗体,主要有:间接法、竞争法和夹心法,其中夹心法又分为双抗原夹心法和双抗体夹心法。
1、间接法 间接法一般用于抗体的检测,其胶体金垫用待测抗体的多克隆抗体进行包被,检测线(T线)用待测抗体的抗原蛋白进行包被,控制线(C线)用金标抗体的二抗进行包被。如一个阳性样本进行检测,样品中的抗体先与胶体金垫中的多克隆抗体结合,经过检测线时与检测线上包被的抗原蛋白结合并不断累积胶体金并显色。多余的金标多克隆抗体继续前行与质控线上包被的金标抗体的二抗结合,不断累积并显色。T线和C线均显色为阳性,T线不显色、C线显色为阴性,T线和C线均不显色为无效。
2、竞争法 竞争法经常用来检测小分子抗原,其胶体金垫上吸附的金标抗原或抗体和待测物与检测线(T线)上包被的抗体或抗原进行竞争性结合。如一个阳性样本进行检测,待测物中的抗体与检测线包被的抗体可竞争性结合金标抗原表面有限的抗原位点。随着待测物的增多,待测物与金标抗原结合越多,便导致检测线上包被的抗体无法和金标抗原结合,则检测线(T线)无法显色。而质控线(C线)上的二抗与抗原却不存在竞争关系,金标抗原层析到质控线时与二抗结合并不断累积而显色。与间接法结果不同的是,T线和C线均显色为阴性,T线不显色、C线显色为阳性,T线和C线均不显色为无效。
3、双抗体夹心法 常用来检测抗原样本,胶体金垫用待测物的单克隆抗体包被,检测线(T线)用针对待测物另一位点的单克隆抗体包被,控制线(C线)用金标抗体的二抗进行包被。如一个阳性样本进行检测,待测物同时与金标抗体和检测线单抗结合形成一个双抗体夹心待测物(抗原)的大分子,这个大分子在检测线上聚集并显色,多余的金标抗体继续层析至控制线并与其包被的二抗结合而显色。T线和C线均显色为阳性,T线不显色、C线显色为阴性,T线和C线均不显色为无效。
双抗原夹心法与双抗体夹心法的原理基本一致,只是胶体金垫和检测线(T线)用已知的抗原进行包被,主要用来进行抗体的检测。