免疫胶体金诊断技术 初应用在尿液与血清绒毛膜促性腺的检测中,后随着我国技术的不断发展,有专家学者提出胶体金可用于标记物的替代酶,参与渗滤实验,在人类免疫缺陷病毒抗体检测试剂盒的生产中广泛的应用。金标卡板免疫胶体金诊断技术具备操作方便、等特点,在传染病病原抗体、妊娠试验中广泛的应用,但在兽医诊断中的应用处于初级阶段。
一、免疫胶体金诊断技术的原理
固相载体通过微孔滤膜包被已知抗体或者是抗原,并加入待测样本,通过毛细管虹吸或者是微孔膜渗滤等作用与包被后的抗体、抗原相结合, 后再与胶体金标记物产生反应。现阶段,免疫胶体金诊断技术在兽医诊断中的应用分为两种方法:免疫层析试验与免疫渗滤试验。
1、免疫层析试验 将具备特异性的抗体或者是抗原固定在膜上,并将该范围选作检测带。把胶体金标记物放置于玻璃纤维结合释放垫中进行干燥,且胶体金标记物两端分别连接在样品垫与膜上,膜另外一端连接在吸水垫中。加入液体样品,通过发生扩散,从而移动,在此作用下,玻璃纤维中的标记物会出现水化,与胶体金标记物发生反应,并向前泳动,一直到检测线结束,检测线截获待测物与标记物,显示红色。如果在样品中部存在待测物,说明其和游离标记物抵达质控线位置,红色是胶体金和质控线发生反应而显示红色。
2、免疫渗滤试验 固相载体通过微孔滤膜把具备特异性的抗体或者是抗原进行固定,将吸水材料填满渗滤装置,并将固定好的固相载体置入,一般情况下,扁形盒上方有小孔,并在试验过程中,把标本盒金标结合物分别滴在膜中,抗原抗体利用渗滤作用与膜上发生免疫结合并显色。以待测物为基础选择不同的试验方法,特别是在免疫球蛋白检测试验中, 好选择捕获法,而抗体检测选择问接法。
二、免疫胶体金诊断技术具备的优势
1、操作简便 无需仪器设备辅助,利用渗滤试剂盒或者是试纸条就能够完成试验,且样品在简单处理后就可开展试验。
2、特异性良好 金标卡板免疫胶体金诊断技术在单克隆抗体的标记中应用较为广泛,因而具备良好的特异性。
3、灵敏度良好 免疫胶体金诊断技术具备良好的灵敏度,并不受其特异性的影响。有的试验操作中,灵敏度在1ng/ml或者是略低水平,少数试验的灵敏度不在该范围中,利用免疫金银染色法与生物素亲合素系统能够提高银加强试验的敏感度。
4、判定难度低 由于试验显色颜色非常明显,因此可通过肉眼判断阴、阳性。
5、、 金标卡板免疫胶体金诊断技术在5~10min内就能显示试验结果,明显短于其他方法。